土壤RNA提取试剂盒怎么用？新手也能轻松上手的操作教程

更新时间：2025-12-12

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　　对于新手来说，使用土壤RNA提取试剂盒可能会感到有些复杂，但只要按照正确的步骤操作，就能轻松上手。以下是一个简单易懂的操作教程：

　　一、试剂盒组成及准备

　　土壤RNA提取试剂盒通常包括以下主要组分：

　　裂解管、SFRNA裂解液、RNA结合液、RNA预洗液、RNA洗涤液、RNase-freeH?O等。

　　还有用于提取的柱子(如3号柱和1号柱)以及收集管等。

　　在开始操作前，需要做好以下准备：

　　确保所有试剂和耗材都已准备好，并且在使用前仔细阅读试剂盒说明书。

　　RNA洗涤液使用前需添加无水乙醇，并做好标记。

　　操作时需佩戴手套和防护眼镜，避免试剂对皮肤和眼睛造成刺激。

　　二、操作步骤

　　样品裂解：取250mg以内的土壤样品加入裂解管，添加1mlSFRNA裂解液，涡旋混匀后离心1分钟。

　　上清转移：将400μl上清转移至1.5ml离心管，添加等体积RNA结合液混匀。

　　初次离心：将混合物转移至3号柱，离心1分钟，保留滤出液。

　　乙醇添加：向滤出液中添加等体积无水乙醇(约800μl)，混匀。

　　二次离心：将混合液转移至新的3号柱，离心1分钟，去除滤出液。

　　预洗：添加400μlRNA预洗液至柱子，离心1分钟，移至干净离心管。

　　洗脱RNA：添加100μlRNase-freeH?O至柱基质，离心1分钟洗脱RNA。

　　PCR抑制物去除：将洗脱的RNA放入PCR去除柱，离心1分钟。

　　结合液添加：向滤出物中添加200μlRNA结合液，混匀。

　　乙醇添加：添加300μl无水乙醇，混匀。

　　三次离心：将混合液转移至1号柱，离心1分钟，去除滤出液。

　　预洗：添加400μlRNA预洗液至柱子，离心1分钟，去除滤出液。

　　洗涤：添加700μlRNA洗涤液至柱子，离心1分钟，去除滤出液。

　　二次洗涤：添加400μlRNA洗涤液至柱子，离心2分钟，确保去除洗涤液。

　　最终洗脱：将1号柱移至干净离心管，添加15μlRNase-freeH?O至柱基质，离心1分钟洗脱RNA，得到的RNA可用于后续实验或在-80°C以下保存。

　　三、注意事项

　　避免试剂长时间暴露于空气中，使用后及时盖紧盖子。

　　操作过程中尽量避免RNA降解，使用RNase-free的试剂和耗材。

　　如果提取的RNA需要用于下游的酶切、PCR等实验，建议在提取后进行质量检测。

　　通过以上步骤，即使是新手也能轻松完成土壤RNA的提取。只要严格按照试剂盒说明书操作，就能获得高质量的RNA，为后续的分子生物学实验打下坚实基础。