AAT Bioquest 活细胞死细胞活力检测试剂盒

AAT Bioquest   22789  活细胞或死™细胞活力检测试剂盒 *绿色/红色双荧光*

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AAT Bioquest 活细胞死细胞活力检测试剂盒-常备现货

美国 AAT Bioquest Inc.(前身是 ABD Bioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AATBioquest 的产品帮助 quan shi jie 的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest 会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。

AAT Bioquest  22789  活细胞或死™细胞活力检测试剂盒 *绿色/红色双荧光*  200 Tests，产品简介：

产品品牌：AAT Bioquest

产品货号：22789

产品名称：活细胞或死™细胞活力检测试剂盒 *绿色/红色双荧光*

产品规格：200 Tests

AAT Bioquest 活细胞死细胞活力检测试剂盒-常备现货 

AAT Bioquest  22789  活细胞或死™细胞活力检测试剂盒 *绿色/红色双荧光*  200 Tests，产品说明：

这种活细胞或死™细胞活力使用两种荧光指示剂：用于活细胞的钙黄绿素AM和用于膜受损细胞的细胞不可渗透的DNA结合染料。钙黄绿素AM是一种疏水性化合物，很容易渗透到完整的活细胞中，并在酯酶水解时变成强烈的荧光。非荧光钙黄绿素AM通过细胞内酯酶水解产生强荧光亲水性钙黄绿素，该钙黄绿素很好地保留在细胞质中。酯酶活性与小瓶细胞的数量成正比。DNA结合染料具有很强的极性，对于具有完整膜的活细胞来说是不渗透的。它只有在与死细胞的DNA结合时才会发出荧光。在黑壁平板中生长的细胞可以在不到两小时的时间内进行染色和定量。该测定比其他活性测定更稳健、更准确。它可以很容易地适应各种荧光平台中的高通量测定，例如微孔板测定、免疫细胞化学和流式细胞术。该试剂盒通过优化的检测方案提供所有基本组件。它适用于增殖和非增殖细胞，可用于悬浮细胞和贴壁细胞。该试剂盒以 100 孔格式每孔使用 96 ul 试剂，可提供足够的试剂进行 100 次检测。该试剂盒以 25 孔形式每孔使用 384 ul 试剂，可提供足够的试剂进行 400 次检测。

组件

组分A：细胞钙黄绿™  2 瓶，冻干

组分B：碘化丙啶  1 瓶（10 mM，40 μL）

组件C：DMSO     1 瓶 （100 μL）

组分D：检测缓冲液    1 瓶 （20 mL）

1.    用测试化合物制备细胞

2.    加入相同体积的细胞钙黄绿™/碘化丙啶染料工作溶液（100 μL/孔/ 96孔板或25 μL/孔/ 384孔板）

3.    在室温或 37°C 下孵育 1 小时

4.    监测强度（底部读数模式）Ex/Em = 490/525 nm（截止值 = 515 nm，活体）和 540/620 nm（截止值 = 590 nm，死）的荧光，带FITC滤光片（活）和TRITC滤光片（死）的荧光显微镜，或带FL1和FL2通道的流式细胞仪

重要注意事项：在开始实验之前，在室温下解冻每种试剂盒组分之一。

储备液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

1.细胞钙黄绿™储备溶液：

将20 μL DMSO（组分C）加入细胞钙黄绿（组分A）小瓶中，充分混合制成细胞钙黄绿™™储备溶液。避光。注意：20 μL 细胞钙黄绿™储备溶液足以用于一个板。储存时，请密封管子。

工作溶液的制备

将全部内容量 （20 μL） 的细胞钙黄绿储备溶液和 20 μL 碘化丙啶（组分 B）加入 10 mL 检测缓冲液（组分 C）中，充分混合制成细胞钙黄绿™™/碘化丙啶染料工作溶液。细胞钙黄绿™/碘化丙啶染料工作溶液在室温下可稳定保存至少 2 小时。注意：如果CHO细胞等细胞含有有机阴离子转运蛋白，导致荧光染料随时间推移泄漏，则应制备丙磺shu储备溶液，并以最终孔内工作浓度范围为1至2.5 mM添加到上样缓冲液中。未使用的丙磺shu储备溶液可储存在 ≤ -20oC.由于最佳染色条件可能因不同的细胞类型而异，因此建议分别确定组分A和B的适当浓度。

实验方案样本

使用酶标仪或荧光显微镜运行细胞活力测定：

1.    根据需要用测试化合物处理细胞。注意：在添加化合物之前不需要清洗细胞。但是，如果测试化合物对血清敏感，则可以在添加化合物之前吸走生长培养基和血清因子。抽吸后加入 100 μL/孔/96 孔板和 25 μL/孔/384 孔板的 1X Hank 盐溶液和 20 mM Hepes 缓冲液 （HHBS） 或您选择的缓冲液。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

2.    加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）细胞钙黄绿™/碘化丙啶染料工作溶液。

3.    将板在室温或 37°C 下孵育 30 分钟至 1 小时，避光。（孵育时间可以从15分钟到过夜。我们在孵育时间少于4小时的情况下获得了最佳结果）。注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。上样后不要清洗细胞。对于非贴壁细胞，建议在孵育后以800rpm离心细胞板2分钟，制动器关闭。

4.    使用荧光板读数器（底部读取模式）在Ex / Em = 490 / 525 nm（截止= 515 nm，活体）和Ex / Em = 540 / 620 nm（截止= 590 nm，死）或荧光显微镜与FITC滤光片监测荧光强度活细胞或TRITC滤光片用于死细胞。

使用流式细胞仪运行细胞活力测定：

1.    用测试化合物处理细胞所需的时间。

2.    离心细胞得到 1 - 5 × 10⁵细胞/管。

3.    将细胞重悬于500μL细胞钙黄绿™/碘化丙啶染料工作溶液中。

4.    在室温或 37°C 下孵育 10 至 30 分钟，避光。

5.    自选：用您选择的HHBS或缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于 500 μL HHBS 中，得到 1 - 5 × 105每管细胞数。

6.    使用流式细胞仪在Ex / Em = 490/525 nm和Ex / Em = 490/620 nm（FL1和FL2通道）处监测荧光强度。

产品订购信息：

22789  活细胞或死™细胞活力检测试剂盒 *绿色/红色双荧光*  200 Tests