为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被 wan quan 解析的生物种等也同样不适合于本方法。在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。
PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。
使用本制品合成的cDNA适用于嵌合法和探针法qPCR分析，可以根据实验目的，选择与TB Green® Premix Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)*、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420A/B)*、Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 组合使用。
*：Takara嵌合法Real Time PCR（qPCR）产品的名称从2017年12月下旬开始，将逐步变更为「TB Green系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化，请继续放心使用。
产品名称将随新lot的产品逐步变更，产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更，望知悉！
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试剂盒特长
1. 含有去除基因组DNA的gDNA Eraser，只需2 min即可除去基因组DNA。
2. 只需15 min即可高效合成Real Time PCR反应用模板cDNA，是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的理想试剂。
3. 反转录引物使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer混合的RT Primer Mix，可以均匀合成样品中的各种cDNA。
4. 本制品提供了TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法各自适合的反应体系，可以根据分析方法选择体系。
TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法区别如下：
(1) 反转录反应中RT Primer Mix的用量。
(2) 反转录反应中总RNA的用量。
5. Real Time RT PCR定量需要建立标准曲线，建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TE Buffer稀释时，由于模板浓度低不稳定，因而会缩小曲线范围，结果准确度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution (for Real Time PCR) ，将Total RNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。
注意事项
1．使用本制品合成的cDNA与TB Green关联制品组合使用时，建议使用：
TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR820Q/A/B)
TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B)
以上制品与本制品组合使用，可以得到可信度高的结果。
本制品与TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B) 组合使用时，有时反应性能不好，不推荐使用。
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