AAT Bioquest 荧光细胞内pH测定试剂盒

AAT Bioquest  21180  Cell Meter™ 荧光细胞内 pH 测定试剂盒

我们北京云肽生物科技有限公司作为AAT Bioquest公司的特约经销商为客户提供，正规进口，保证原装正品，货期稳定，折扣好的服务标准。

AAT Bioquest 荧光细胞内pH测定试剂盒

美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助 quan 世 jie 的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。

AAT Bioquest  21180  Cell Meter™ 荧光细胞内 pH 测定试剂盒  1000 Tests，产品简介：

产品品牌：AAT Bioquest

产品货号：21180

产品名称：Cell Meter™ 荧光细胞内 pH 测定试剂盒

产品规格：1000 Tests

AAT Bioquest 荧光细胞内pH测定试剂盒 

AAT Bioquest  21180  Cell Meter™ 荧光细胞内 pH 测定试剂盒  1000 Tests，产品说明：

细胞内pH值变化与多种生理和病理过程有关，包括细胞增殖，细胞凋亡，受精，恶性肿瘤，多药耐药性，离子转运，溶酶体贮积症和阿尔茨海默病。细胞计™荧光法细胞内pH测定试剂盒利用AAT Bioquest专有的荧光指示剂来测量细胞内pH值的相对变化。它是一种均质的动力学活细胞荧光测定，采用标准程序或酸负荷程序。标准方案设计用于测量感兴趣的治疗靶点，治疗时细胞内pH值降低。“酸负荷"程序旨在测量与GPCR活化或生长因子活性引起的细胞代谢变化相关的细胞内pH值的增加。通过“酸负荷"程序，在荧光pH染料以最小体积加载到细胞中后，加入氯化铵溶液。该“酸加载"步骤之后在相对大体积（~4X）的缓冲液中添加激动剂。突然的体积变化引发细胞中的氨（NH3）外排，导致细胞内pH值迅速降低，从而降低荧光信号。激动剂对细胞内pH后续恢复的影响通过相对荧光信号增加来测量。

平台

荧光酶标仪

Excitation：490纳米

Emission：535纳米

Cutoff：515纳米

推荐板：黑色墙壁/透明底部

组件

组件A：RatioWorks™ BCFL，AM     1瓶

组件B：10X Pluronic F127 Plus   1 瓶 （10 mL）

组分C：HHBS（Hanks缓冲液，含20 mM肝素）     1 瓶 （100 mL）

组分 D：50 mM 准备使用™probenecid  1 瓶 （10 mL）

用于标准电池负载（单板）

1.    在生长培养基中制备细胞

2.    加入等体积的RatioWorks™ BCFL，AM染料加工溶液

3.    在37°C孵育1小时

4.    在Ex/Em= 490/535 nm（截止= 515 nm）下读取荧光，加入50 μL/孔化合物（或比率为500/530 nm和440/530 nm）

协议摘要

用于酸负荷（一个 96 孔板）

1.    在生长培养基中制备细胞

2.    去除生长培养基

3.    添加 RatioWorks™ BCFL、AM 染料工作溶液（50 μL/孔/96 孔板）

4.    在 37°C 下孵育 1 小时

5.    添加 220 mM NH₄氯（5 μL/孔）

6.    在室温下孵育 15 分钟

7.    在Ex/Em= 490/535 nm（截止= 515 nm）下读取荧光，加入200 μL/孔化合物（或比率为500/530 nm和440/530 nm）

重要事项：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

RatioWorks™ BCFL， AM 库存解决方案

将 200 μL DMSO 加入 RatioWorks BCFL、AM（组分 A）的小瓶中，并充分混合以制成 RatioWorks™™ BCFL、AM 储备溶液。

注意 20 μL 重构 RatioWorks™ BCFL、AM 储备溶液足以用于 1 板标准细胞负载。10 μL 重构 RatioWorks™ BCFL、AM 储备溶液足以用于 1 板酸负荷。RatioWorks™ BCFL，AM储备溶液可以储存在≤-20oC 如果管子密封严密，则一个月。避光。

工作溶液的制备

1. 用于标准电池负载（单板）

1. 将 1 mL 的 10X Pluronic F127 Plus（组分 B）加入 9 mL 的 HHBS（组分 C）中，充分混合制成 1X 测定缓冲液。

注意对于需要丙磺shu上样的细胞（例如CHO细胞），稀释50 mM准备以™ 1至5 mM的浓度使用丙磺shu（组分D）（CHO细胞 shou xuan 5 mM）。

2. 将 20 μL 重构的 RatioWorks BCFL、AM 储备溶液加入 10 mL 的 1X 测定缓冲液中，充分混合，制成 RatioWorks™™ BCFL、AM 染料工作溶液。该RatioWorks™ BCFL，AM染料工作溶液在室温下可稳定至少2小时。

2. 用于酸负荷（一个 96 孔板）

1. 将 1 mL 的 10X Pluronic F127 Plus（组分 B）加入 4 mL 的 HHBS（组分 C）中，充分混合制成 1X 测定缓冲液。

注意对于需要丙磺shu上样的细胞（例如CHO细胞），稀释50 mM准备以™ 0.5至2.5mM的浓度使用丙磺shu（组分D）（CHO细胞 shou xuan 2.5 mM）。

2. 将 10 μL 重构的 RatioWorks BCFL、AM 储备溶液加入 5 mL 的 1X 测定缓冲液中，充分混合，制成 RatioWorks™™ BCFL、AM 染料工作溶液。该RatioWorks™ BCFL，AM染料工作溶液在室温下可稳定至少2小时。

实验方案样本

运行标准细胞载量pH测定

1.    将 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）RatioWorks™ BCFL、AM 染料工作溶液添加到细胞板中。

注意 如果您的化合物干扰血清，请务 bi yong  HHBS 缓冲液替换生长培养基（100 孔板为 96 μL/孔，染料上样前为 25 孔板为 384 μL/孔）。

2.    将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后在室温下再孵育板30分钟。

注意如果测定需要37°C，请立即进行实验，无需进一步室温孵育。

3.    使用 HHBS 或所需的缓冲液制备复合板。

4.    通过监测Ex / Em = 490 / 535 nm（截止= 515 nm）或500/530 nm和440/530 nm（截止= 515 nm）的荧光进行比率测量来运行pH测定。化合物添加量为 50 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）。

注意 该测定应在化合物添加后 3 至 5 分钟内完成，但建议在测定开发期间至少收集 8 分钟的数据。

运行酸负荷的pH测定

1.    从细胞板中取出生长培养基。

2.    将 50 μL/孔/96 孔板 RatioWorks™ BCFL、AM 染料工作溶液添加到细胞板中。

3.    将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后在室温下再孵育板30分钟。注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，无需进一步室温孵育。

4.    加入 5 μL 220 mM NH4Cl 并将板离心 5 秒钟。在室温下孵育15分钟。

注意新罕 bu shen 尔州4Cl溶液应在HHBS（组分C）中新鲜制备。

5.    使用 HHBS 或所需的缓冲液制备复合板。

6.    通过监测Ex / Em = 490 / 535 nm（截止= 515 nm）或500/530 nm和440/530 nm（截止= 515 nm）的荧光进行比率测量来运行pH测定。化合物添加量为 200 μL/孔/96 孔板。

注意 该测定应在化合物添加后 3 至 5 分钟内完成，但建议在测定开发期间至少收集 8 分钟的数据。

产品订购信息：

21180  Cell Meter™ 荧光细胞内 pH 测定试剂盒  1000 Tests